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离心机按用途分为工业用离心机和实验用离心机。后者根据功能又分为制备性离心机和分析性离心机。制备性离心机一般用来分离各种生物材料,分离的样品量比较大,也是大多数科研实验室配备的离心机种类。分析性离心机常用来研究纯的生物大分子和颗粒的理化性质,一般有光学系统,可监测粒子在离心场中的行为,能推断物质的纯度、形状和分子量等,且都是超速离心机。此处和大家伙儿一起来分享下几种实验室常用的制备性离心机。
转速为2000-25000rpm,最大RCF为89000×g,最大容量可达3L,一般都有制冷系统,以消除非常快速地旋转转头与空气之间摩擦而产生的热量,离心室的温度能调节和维持在0℃-4℃,可以严格准确的控制转速温度和时间,并有指针或数字显示。通常用于微生物菌体、细胞碎片、大细胞器、硫酸铵沉淀和免疫沉淀物等的分离纯化工作,但不能有效地沉降病毒、小细胞器或单个分子。高速离心机是实验室中最常见的离心机类型,一般的分子实验室都会配备。
转速可达50000-80000rpm,RCF最高可达510000×g,离心容量由几十毫升至2升,分离形式为差速沉降分离和密度梯度区带分离,需严格配平(误差<0.1g)。与高速离心机的主要区别是增加了真空系统。常用于分离亚细胞器、病毒、核酸、蛋白质和多糖等。超速离心机价格较高,一般只有大型实验室或公共平台才进行配备。
离心管与转子的转轴之间有一定的角度,角度变化范围通常在14°-45°,如下图1。此种转子重心低,寿命长,容量较大,转速较高,能承受的最大离心力可达800000g。大多数都用在分离沉降速度有明显差异的颗粒样品。颗粒在扇形溶液移动的距离很短,碰到外壁的颗粒沿着管壁滑到管底,形成沉淀,因此这种转子能很快地收集沉淀物。分离过程中,由于管壁的作用,在离心管内将会引起强烈的对流,对具有相同沉降速率的颗粒会产生不良影响,如图2。
又称甩平转子、荡平转子。转头静止时,处于转头中的离心管中心线与旋转轴平行。转头旋转加速时,离心管中心线由平行位置慢慢地过渡到垂直位置,即与旋转轴成90°角。此种转子大多数都用在样品做密度梯度离心。颗粒移动距离长,相应离心时间一般也较长,溶液中的组分相对于管壁的位置在离心过程中和离心后不发生改变,因此离心效果好,但因颗粒在离心场中是从旋转中沿径向散离出去,而不是按相互平行的路线沉降。颗粒碰到外壁沿着管壁滑到管底,因此也会产生对流,但比固定角转子小,如图4。低速启动或停机时会产生振动,影响分离效果。水平转子又分为敞开式和封闭式两种,一般制备容量大,转速小于10000rpm,离心力场在16000×g以内的,作为敞开式,大多数都用在样品的初分离。制备容量较前者小,转速大于10000rpm,离心力场在16000×g以上的,为减少风力的影响,一般作为封闭式,大多数都用在线粒体、叶绿体、细胞核等的分离和密度梯度离心。此外,用于离心酶标板的转子也可归纳为水平转子,如下图3。
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